产品货号:
SK351
中文名称:
ATP含量检测试剂盒(微量法)
英文名称:
产品规格:
100管/96样
发货周期:
1~3天
产品价格:
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ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。
组分 | 规格 |
试剂一粉剂 | 1瓶 |
试剂二 | 1.5mL |
试剂三粉剂 | 1瓶 |
试剂四 | 5mL |
试剂五 | 25mL |
0.5μmol/mLATP标准液 | 10mL |
保存:4℃
酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、96孔板、研钵和蒸馏水。
- 试剂一:临用前向试剂一粉剂中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
- 试剂三:临用前向试剂三粉剂中加入1.2mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
- ATP提取:
- 组织中ATP的提取:称取约0.1g样本,加入1mL蒸馏水,冰浴匀浆,100℃加热提取5min,8000g 4℃离心15min,取上清液待测。
- 细胞或细菌中ATP的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个)∶蒸馏水(mL)为500~1000∶1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL蒸馏水),超声波破碎1min(冰浴,强度20%或200W,超声2s,停1s),8000g 4℃离心15min;取上清液待测。
- 血清(浆)中ATP的提取:取约0.1mL血清(浆),加入1mL蒸馏水,冰浴匀浆,100℃加热提取5min,8000g 4℃离心15min,取上清液待测。
- 组织中ATP的提取:称取约0.1g样本,加入1mL蒸馏水,冰浴匀浆,100℃加热提取5min,8000g 4℃离心15min,取上清液待测。
- 测定步骤:
- 酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长到700nm,蒸馏水调零。
- 显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.2mL),按试剂四∶试剂五=1∶5的比例配制。用多少配多少。
- 样本测定:
成分(μL) 测定管 标准管 空白管 样本 10 标准液 10 10 试剂一 20 20 试剂二 10 10 10 试剂三 10 10 蒸馏水 30 充分混匀,37℃准确水浴30min 显色剂 200 200 200 37℃水浴20min后,700nm下测定各管吸光值 - 空白管和标准管通常只需要各做一个。
- 酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长到700nm,蒸馏水调零。
- 血清(浆)中ATP含量计算
ATP含量
(μmol/mL)= C标准× A测定-A空白 ×V1÷(V3×V1÷V2) A标准-A空白 = 5× A测定-A空白 A标准-A空白 - 组织、细菌或细胞中ATP含量计算
- 按蛋白浓度计算
ATP含量
(μmol/mg prot)= C标准× A测定-A空白 ×V1÷(V1÷Cpr) A标准-A空白 = 0.5× A测定-A空白 ÷Cpr A标准-A空白 - 蛋白质含量需要另外测定。
- 按样本鲜重计算
ATP含量
(μmol/g鲜重)= C标准× A测定-A空白 ×V1÷(W×V1÷V2) A标准-A空白 = 0.5× A测定-A空白 ÷W A标准-A空白 - 按细菌或细胞密度计算
ATP含量
(μmol/104 cell)= C标准× A测定-A空白 V1÷(500×V1÷V2) A标准-A空白 = 0.001× A测定-A空白 A标准-A空白
- 按蛋白浓度计算
C标准:标准液浓度,0.5μmol/mL;
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;
V2:加入提取液体积,1mL;
V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本质量,g;
500:细胞或细菌总数,500万。
- 最低检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot。
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